Лада 2328: ВАЗ 2328: цена ВАЗ 2328, технические характеристики ВАЗ 2328, фото, отзывы, видео

ВАЗ 2328 / ВАЗ 2328 «Волк» 1995 — цены, технические характеристики, дорожный просвет (клиренс), габариты, двигатели

Подбор по параметрам

Поиск по маркеAcuraAlfa RomeoAlpinaAROAsiaAudiAvtokamBaojunBAWBeijingBentleyBertoneBMWBorgwardBrillianceBrontoBuickBYDCadillacChanaChanganChangFengChangheCheryChevroletChryslerCHTC AutoCitroenCoggiolaCowinDadiDaewooDaihatsuDallasDerwaysDodgeDongfengDSEnrangerFAWFiatFodayFordFotonFuqiGACGAZGeelyGeoGMCGonowGreat WallHaimaHantengHavalHawtaiHigerHoldenHondaHuanghaiHummerHyundaiInfinitiIsuzuIvecoJACJaguarJeepJinbeiJMCJonwayKiaKombatLadaLamborghiniLand RoverLandwindLexusLifanLincolnLuAZLuxgenLynk CoMahindraMarutiMaseratiMazdaMercedesMercuryMGMINIMitsubishiNissanOldsmobileOpelPeroduaPeugeotPontiacPorschePUCHQorosRenaultRoeweRolls-RoyceSaabSantanaSaturnSEATShuanghuanSkodaSoueastSsangYongSubaruSuzukiSWMTagAZTataTeslaTianmaTianyeToyotaTraumUAZVenuciaVolkswagenVolvoWeyWulingXin KaiYemaZibarZotyeZX

• Пикап ВАЗ 2328 «Волк»
• Годы выпуска: 1995 — 1997
• Количество мест: 2

Технические характеристики модификаций

Модификация	Цена от	Привод	Топливо	Трансмиссия	Разгон	Скорость	Расход
1. 7 MT 4×4 (79 л.с.)	н/д	полный	бензин	механическая	25 сек	132 км/ч	12.1 л

Длина:	4540 мм
Ширина:	1640 мм
Высота:	1640 мм
Колесная база:	2700 мм
Дорожный просвет:	220 мм
Объем багажника:	265 л

Внедорожники и кроссоверы Lada

Архивные модели Lada

ВАЗ-2328 — первый пикап ВАЗ

В начале 90-х многие автомобильные заводы бывшего СССР столкнулись с проблемой реализации автомобилей. Пытаясь найти дополнительных клиентов, предприятия начинают лихорадочно вводить в модельные ряды новые модификации. Так появляются автомобили с кузовами пикап или кабриолет, созданные на базе серийных автомобилей.

Разработка пикапа

Не остался в стороне от таких тенденций и крупнейший производитель автомобилей в СССР – завод ВАЗ. Единственным отличием стало то, что разработку и производство новых модификаций вели дочерние предприятия. Одним из таких предприятий являлось ООО «Моторика Лада Тул», занимавшееся доработкой автомобилей с полным приводом ВАЗ-2121 «Нива».

Силами специалистов этой фирмы и ОПП ВАЗ в 1995 году были разработаны и производились мелкими сериями два варианта пикапов. Первый вариант машины под обозначением ВАЗ-2328 имел двухместную кабину, второй — ВАЗ-2329 — оснащался удлиненной пятиместной кабиной. Короткий вариант планировался к производству с двумя вариантами заднего свеса – стандартным и удлиненным. Грузовые платформы обеих машин могли оснащаться тентом. Машины позиционировались как транспорт для мелких фермерских хозяйств.

Внутризаводские пикапы

Задолго до разработок «Моторики» на заводе ВАЗ кустарным способом изготовили неизвестное количество пикапов на безе «Нивы». Машины создавались как внутризаводской транспорт. Некоторые использовались для доставки комплектующих от поставщиков. Такие же кустарные пикапы делали и на АЗЛК на базе «Москвича 2141». Исходными узлами для этих машин служили забракованные кузова серийных автомобилей.

Впоследствии, после списания, часть этих машин попала в частное пользование. Такие машины и поныне иногда встречаются на дорогах.

Технические особенности

Полноприводный пикап с двухместной кабиной базировался на узлах удлиненной версии «Нивы». В качестве силового агрегата применялся 79-сильный карбюраторный двигатель. Крутящий момент передавался через пятискоростную коробку передач и двухскоростную раздаточную коробку. Привод всех колес постоянный.

Машина могла разгоняться до скорости не более 132 км/час. Заявленный средний расход бензина А92 при движении по трассе составлял около 12 литров на 100 км. В городских условиях аппетит автомобиля значительно возрастал – до 16-17 литров. Запас бензина находился в двух топливных баках емкостью по 42 литра каждый. Баки располагались по бортам машины.

Тормозная система ВАЗа-2328 была стандартной для продукции завода – диски без вентиляции спереди и барабаны сзади. В рулевом управлении применялся червячный редуктор, усилитель отсутствовал. Машина весила в пустом состоянии 1370 кг, полезная нагрузка составляла полтонны. Задний борт грузовой платформы был откидным. При этом пикап сохранил оригинальную заднюю светотехнику от «Нивы».

Передняя и задняя подвески ВАЗа-2328 конструктивно повторяли аналогичные узлы «Нивы». С учетом более сложных условий эксплуатации элементы подвески были усилены. Благодаря им дорожный просвет машины составлял немалые 220 мм, что позволяло пикапу уверенно преодолевать бездорожье.

Короткая жизнь

Автомобиль ВАЗ-2328 получил неофициальное собственное торговое имя «Волк». Выставочный образец машины имел на двери изображение бегущего волка, отсюда и появилось такое негласное прозвище.

Но ни имя, ни хорошая проходимость не помогли машине обрести популярность. По причине низкого спроса жизнь первого пикапа ВАЗ оказалась недолгой – уже в 1997 году производство было прекращено. Потенциальных покупателей ВАЗа-2328 не устраивали невысокая грузоподъемность и малое количество мест для пассажиров. По некоторым данным, производство ограничилось выпуском установочной партии машин.

[rssless]

Читайте НАС ВКонтакте

[/rssless]

ВАЗ-2328 «Волк» — неудачный пикап на базе «Нивы», который почти сразу сняли с производства | «Сфера» — автомобильный журнал

Источник: Яндекс.Картинки

Здравствуйте, читатели автомобильного журнала «Сфера».

В сегодняшней статье мы рассмотрим крайне интересную модификацию привычного нам внедорожника «Нива». Речь пойдет про ВАЗ-2328 «Волк». Это пикап, который был выпущен небольшой партией.

Давайте попробуем разобраться, чем именно примечателен данный автомобиль.

Особенности ВАЗ-2328

Начнем с небольшой истории появления этого автомобиля. Первая небольшая партия ВАЗ-2328 вышла в середине 90-х годов. Дело в том, что это был полностью экспериментальный автомобиль.

Источник: Яндекс.Картинки

Иное видение классического внедорожника, который теперь превратился в пикап. У машины была «короткая» кабина, которая вмещала двух пассажиров.

Сам пикап собирали на базе «Нивы» ВАЗ-2131 — это классический пятидверный внедорожник. Под капотом у «Волка» расположился карбюраторный четырехцилиндровый мотор.

Источник: Яндекс.КартинкиИсточник: Яндекс.Картинки

Также автомобиль оснастили газораспределительной системой ОНС — на каждый цилиндр установили по два клапана. Мощность двигателя — 79 л.с.

Коробка передач — механическая. Колесная база этой модели «Нивы» — 2.7 м. Дорожный просвет — он же клиренс — 220 мм. На передней и задней подвеске установили винтовые пружины.

Источник: Яндекс.Картинки

Одной из особенностей ВАЗ-2328 «Волк» стало наличие двух видов тормозов: задние — барабанные и передние — дисковые.

Что стало с пикапом?

Как вы уже поняли, автомобиль так и не стал массовым. ВАЗ-2328 «Волк» выпускали всего 2 года. За это время вышла только одна партия. После этого было принято решение закрыть этот экспериментальный проект — видимо, производители остались недовольны финальными результатами.

Источник: Яндекс.КартинкиИсточник: Яндекс.Картинки

На смену «Волку» пришел ВАЗ-2329 «Медведь» — улучшенный пикап.

А вы когда-нибудь видели эту модификацию «Нивы»? Делитесь своими историями в комментариях.

Спасибо, что дочитали статью до конца. Подписывайтесь на канал «Сфера» и не забывайте ставить лайки. Это помогает в развитии проекта.

неактивный датчик cdk1 FRET (2328)

Эти плазмиды созданы вашими коллегами. Пожалуйста, подтвердите Главный исследователь, процитируйте статью, в которой были описаны плазмиды: и включите Addgene в материалы и методы ваших будущих публикаций.

• Для вашего Материалы и методы раздел:

  неактивный датчик cdk1 FRET (2328) был подарком от Джонатон Пайнс (Плазмида Addgene № 26065; http: // n2t.

  сеть / addgene: 26065; RRID: Addgene_26065)

• Для вашего Ссылки раздел:

  Прогрессивная активация CyclinB1-Cdk1 координирует вход в митоз .Гавет О., Пайнс Дж. Dev Cell. 20 апреля 2010 г. 18 (4): 533-43.
  10.1016 / j.devcel.2010.02.013 PubMed 20412769

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

---

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Есть много причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

• В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
• Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, используйте кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
• Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
• Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
• Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie.Вы должны отключить приложение при входе в систему или уточнить у системного администратора.

---

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

---

Что сохраняется в файлах cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файле cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Молекулярная визуализация фиброза с использованием нового коллагенсвязывающего пептида, меченного 99m Tc, на SPECT / CT

An B, Lin YS, Brodsky B (2016) Взаимодействие с коллагеном: дизайн и доставка лекарств.Adv Drug Deliv Rev 97: 69–84. DOI: 10.1016 / j.addr.2015.11.013

CAS Статья PubMed Google ученый

Bala G, Cosyns B (2014) Последние достижения в визуализации уязвимых бляшек: акцент на неинвазивной молекулярной визуализации. Curr Cardiol Rep 16: 520. DOI: 10.1007 / s11886-014-0520-5

Артикул PubMed Google ученый

org/ScholarlyArticle»>

Birbrair A, Zhang T, Wang ZM, Messi ML, Mintz A, Delbono O (2013) Перициты типа 1 участвуют в отложении фиброзной ткани в старых скелетных мышцах.Am J Physiol Cell Physiol 305: C1098 – C1113. DOI: 10.1152 / ajpcell.00171.2013

CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

Бьюрлин М.А., Розенкранц А.Б., Белтран Л.С., Раад Р.А., Танежа С.С. (2015) Визуализация и оценка пациентов с раком простаты высокого риска. Нат Рев Урол 12: 617–628. DOI: 10.1038 / nrurol.2015.242

Артикул PubMed Google ученый

Bondue B et al (2015) ПЭТ / КТ с лейкоцитами, меченными 18F-FDG и 18F-FBEM, для метаболической активности и мониторинга рекрутирования лейкоцитов в модели фиброза легких на мышах. Журнал Nucl Med 56: 127–132. DOI: 10.2967 / jnumed.114.147421

CAS Статья PubMed Google ученый

Караван П. и др. (2007) Контрастное вещество для МРТ с направленным коллагеном для молекулярной визуализации фиброза. Angew Chem Int Ed Engl 46: 8171–8173. DOI: 10.1002 / anie.200700700

CAS Статья PubMed Google ученый

Караван П. и др. (2013) Молекулярная магнитно-резонансная томография фиброза легких у мышей.Am J Respir Cell Mol Biol 49: 1120–1126. DOI: 10.1165 / rcmb.2013-0039OC

CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

org/ScholarlyArticle»>

Кармона-Рибейро А.М., де Мело Карраско Л.Д. (2014) Новые составы антимикробных пептидов. Int J Mol Sci 15: 18040–18083. DOI: 10.3390 / ijms151018040

CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

Chopra A (2004) [99mTc] Вазоактивный кишечный пептид-аминомасляная кислота-Gly-Gly- (D) -Ala-Gly.База данных Molecular Imaging and Contrast Agent

Depraetere H, Viaene A, Deroo S, Vauterin S, Deckmyn H (1998) Идентификация пептидов, выбранных с помощью технологии фагового дисплея, которые ингибируют связывание фактора фон Виллебранда с коллагеном. Кровь 92: 4207–4211

CAS PubMed Google ученый

org/ScholarlyArticle»>

Fallowfield JA et al (2014) Релаксин модулирует функцию миофибробластов печени человека и крысы и уменьшает портальную гипертензию in vivo.Гепатология 59: 1492–1504. DOI: 10.1002 / hep.26627

CAS Статья PubMed Google ученый

Feng S. et al (2014) Модуляция, биоинформатический скрининг и оценка низкомолекулярных пептидов, нацеленных на рецептор фактора роста эндотелия сосудов. Cell Biochem Biophys 70: 1913–1921. DOI: 10.1007 / s12013-014-0151-x

CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

Fields GB (2010) Синтез и биологические применения трехспиральных пептидов коллагеновой модели. Org Biomol Chem 8: 1237–1258. DOI: 10.1039 / b920670a

CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

Fuchs BC et al (2013) Молекулярная МРТ коллагена для диагностики и определения стадии фиброза печени. J Hepatol 59: 992–998. DOI: 10.1016 / j.jhep.2013.06.026

CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

Helm PA et al (2008) Постинфарктное рубцевание миокарда у мышей: молекулярная МРТ с использованием контрастного агента, нацеленного на коллаген.Радиология 247: 788–796. DOI: 10.1148 / radiol.2473070975

Артикул PubMed Google ученый

org/ScholarlyArticle»>

Helms BA, Reulen SW, Nijhuis S, de Graaf-Heuvelmans PT, Merkx M, Meijer EW (2009) Таргетинг на высокоаффинный пептидный коллаген с использованием синтетических имитаторов фага: от фагового дисплея до дендримерного дисплея. J Am Chem Soc 131: 11683–11685. DOI: 10.1021 / ja

5m

CAS Статья PubMed Google ученый

Ho YY, Lagares D, Tager AM, Kapoor M (2014) Фиброз — летальный компонент системного склероза.Nat Rev Rheumatol 10: 390–402. DOI: 10.1038 / nrrheum.2014.53

CAS Статья PubMed Google ученый

Kilic T. et al (2014) Защитный и терапевтический эффект молсидомина на вызванный блеомицином фиброз легких у крыс. Воспаление 37: 1167–1178. DOI: 10.1007 / s10753-014-9841-1

CAS Статья PubMed Google ученый

Lee ER, Lamplugh L, Kluczyk B, Leblond CP, Mort JS (2009) Неоэпитопы раскрывают особенности расщепления коллагена типа II и идентичность коллагеназы, участвующей в трансформации зачатка эпифизов в процессе развития.Дев Дин 238: 1547–1563. DOI: 10.1002 / dvdy.21960

CAS Статья PubMed Google ученый

Lee SH, Moroz E, Castagner B, Leroux JC (2014) Активируемый проникающий в клетку конъюгат пептид-пептид-нуклеиновая кислота посредством восстановления цепей азобензола PEG. J Am Chem Soc 136: 12868–12871. DOI: 10.1021 / ja507547w

CAS Статья PubMed Google ученый

org/ScholarlyArticle»>

Li Y et al (2012) Нацеливание на коллагеновые нити с помощью фото-триггерной гибридизации с тройной спиралью.Proc Natl Acad Sci USA 109: 14767–14772. DOI: 10.1073 / pnas.1209721109

CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

Liu Z, Li Z (2014) Молекулярная визуализация для отслеживания опухолеспецифических цитотоксических Т-лимфоцитов (CTL). Тераностика 4: 990–1001. DOI: 10.7150 / thno.9268

Артикул PubMed PubMed Central Google ученый

Long KB, Artlett CM, Blankenhorn EP (2014) Мыши Tight skin 2 демонстрируют новую временную шкалу событий, ведущих к увеличению отложения внеклеточного матрикса и фиброзу кожи. Матрица Биол 38: 91–100. DOI: 10.1016 / j.matbio.2014.05.002

CAS Статья PubMed Google ученый

Лу С. и др. (2013) Количественная визуализация FRET для визуализации инвазивности живых клеток рака груди. PLoS One 8: e58569. DOI: 10.1371 / journal.pone.0058569

CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

Mandal SM, Mahata D, Migliolo L, Parekh A, Addy PS, Mandal M, Basak A (2014) Глюкоза напрямую способствует противогрибковой устойчивости у грибкового патогена, Candida spp.J Biol Chem 289: 25468–25473. DOI: 10.1074 / jbc.C114.571778

CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

org/ScholarlyArticle»>

Мур BB, Hogaboam CM (2008) Мышиные модели фиброза легких. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol 294: L152 – L160. DOI: 10.1152 / ajplung.00313.2007

CAS Статья PubMed Google ученый

Moroni G et al (2012) Значение (18) F-FDG PET / CT в оценке активного идиопатического ретроперитонеального фиброза.Eur J Nucl Med Mol Imaging 39: 1635–1642. DOI: 10.1007 / s00259-012-2144-6

Артикул PubMed Google ученый

Muzard J et al (2009) Неинвазивная молекулярная визуализация фиброза с использованием нацеленного на коллаген пептидомиметика гликопротеина рецептора коллагена тромбоцитов VI. PLoS One 4: e5585. DOI: 10. 1371 / journal.pone.0005585

Артикул PubMed PubMed Central Google ученый

Neeb M, Czodrowski P, Heine A, Barandun LJ, Hohn C, Diederich F, Klebe G (2014) Погоня за протонами: как калориметрия изотермического титрования, мутагенез и расчеты pKa отслеживают локус заряда в связывании лиганда с тРНК-связывающий фермент.J Med Chem 57: 5554–5565. DOI: 10.1021 / jm500401x

CAS Статья PubMed Google ученый

Pallela VR, Thakur ML, Chakder S, Rattan S (1999) 99 mTc-меченный агонист вазоактивного кишечного пептидного рецептора: функциональные исследования. J Nucl Med 40: 352–360

CAS PubMed Google ученый

org/ScholarlyArticle»>

Polasek M et al (2012) Молекулярная МРТ фиброза печени: технико-экономическое обоснование с использованием моделей крыс и мышей.J Hepatol 57: 549–555. DOI: 10.1016 / j.jhep.2012.04.035

Артикул PubMed PubMed Central Google ученый

Rockey DC, Bell PD, Hill JA (2015) Фиброз — распространенный путь к повреждению и отказу органов. N Engl J Med 372: 1138–1149. DOI: 10.1056 / NEJMra1300575

CAS Статья PubMed Google ученый

Rosado E, Rodriguez-Vilarrupla A, Gracia-Sancho J, Tripathi D, Garcia-Caldero H, Bosch J, Garcia-Pagan JC (2013) Терутробан, антагонист TP-рецепторов, снижает давление в воротной вене у цирротических крыс. Гепатология 58: 1424–1435. DOI: 10.1002 / hep.26520

CAS Статья PubMed Google ученый

Tye CE, Hunter GK, Goldberg HA (2005) Идентификация коллаген-связывающего домена типа I костного сиалопротеина и характеристика механизма взаимодействия. J Biol Chem 280: 13487–13492. DOI: 10.1074 / jbc.M408923200

CAS Статья PubMed Google ученый

Wahyudi H, Reynolds AA, Li Y, Owen SC, Yu SM (2016) Ориентация на коллаген для диагностической визуализации и терапевтической доставки.J Control Release. DOI: 10.1016 / j.jconrel.2016.01.007

PubMed Google ученый

org/ScholarlyArticle»>

Win T et al (2012) Новая позитронно-эмиссионная томография / компьютерная томография диффузного паренхиматозного заболевания легких, сочетающая меченый аналог рецептора соматостатина и 2-дезокси-2 [18F] фтор-d-глюкозу. Mol Imaging 11: 91–98

CAS PubMed Google ученый

Withana NP et al (2016) Неинвазивная визуализация идиопатического фиброза легких с использованием зондов катепсиновой протеазы.Научный журнал 6: 19755. DOI: 10.1038 / srep19755

CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

Zhang X et al (2013) Визуализация фиброза печени с помощью фазово-контрастной рентгеновской визуализации у мышей с перевязкой общего желчного протока. Eur Radiol 23: 417–423. DOI: 10.1007 / s00330-012-2630-z

Артикул PubMed Google ученый

Zhang JM, Zhao XM, Wang SJ, Ren XC, Wang N, Han JY, Jia LZ (2014) Оценка молекулы ^99m Tc-пептид-ZHER2: 342 Affibody (R) для молекулярной визуализации in vivo.Br J Radiol 87: 20130484. DOI: 10.1259 / bjr.20130484

Артикул PubMed Google ученый

Zhao X et al (2014) Получение и оценка (99m) Tc-рецептора эпидермального фактора роста (EGFR) -пептидной нуклеиновой кислоты для визуализации экспрессии информационной РНК EGFR в злокачественных опухолях. Журнал Nucl Med 55: 1008–1016. DOI: 10.2967 / jnumed.113.136101

CAS Статья PubMed Google ученый

org/ScholarlyArticle»>

Zheng L, Xie G, Duan G, Yan X, Li Q (2011) Высокая экспрессия специфической для семенников протеазы 50 связана с плохим прогнозом при колоректальной карциноме.PLoS One 6: e22203. DOI: 10.1371 / journal.pone.0022203

CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

Чжугэ Y, Xu J (2001) Rac1 опосредует коллаген-зависимую активацию MMP-2 типа I. Роль в клеточной инвазии через коллагеновый барьер. J Biol Chem 276: 16248–16256

CAS Статья PubMed Google ученый

ADAMTS13 помогает отличить тромботическую тромбоцитопеническую пурпуру от других микроангиопатий и указывает на необходимость плазмообменной терапии | Кровь

Реферат 2328

Введение:

Врожденная тромботическая тромбоцитопеническая пурпура (ВТП) вызывается генетическими мутациями в ADAMTS13, металлопротеиназе, которая расщепляет сверхбольшие мультимеры VWF с образованием мультимеров нормального размера, присутствующих в кровотоке. Однако приобретенный дефицит ADAMTS13 из-за аутоантител не повсеместно считается диагностическим признаком идиопатической ТТП. Отличие идиопатической ТТП от других тромботических микроангиопатий (ТМА) важно при выборе лечения, поскольку плазмаферез (ПЭ) полезен только при ТТП и некоторых случаях других микроангиопатий, таких как атипичный ГУС. С января 2006 г. мы регулярно получаем активность ADAMTS13 с помощью анализа FRET из Центра крови Висконсина у всех пациентов с ТМА. Мы сообщаем о диагностической полезности ADAMTS13, позволяющей отличить TTP от других форм TMA.

Методы:

Ретроспективный анализ был выполнен на последовательных пациентах с ТМА, которым тестировали ADAMTS13 с января 2006 г. по октябрь 2010 г. Демографические данные, представляющие клинические и лабораторные особенности, приведены в таблице. Также регистрировались ответы на терапевтический плазмообмен (ТПЭ), диагнозы при выписке и другие клинические состояния. Соответствующий статистический анализ проводился с использованием непарного t-критерия для сравнения средних значений и точного метода Фишера для таблиц сопряженности.

Результаты:

Мы разделили наши случаи на основе тяжелого дефицита ADAMTS13 (<10%) как TTP и нетяжелого дефицита (> 20%) как TMA. Причины TMA включали индуцированный хинином HUS (1), связанный с гемцитабином HUS (1), злокачественную гипертензию / преэклампсию / HEELP (3), сепсис (2), MCTD (5), злокачественные новообразования (3), ИТП (1), ВИЧ / оппортунистическая инфекция (5), лекарственные препараты (1) и множественные (5).

> 3. 0 мг / л)

.	TTP .	TMA .	p-значение .
Всего пациентов	26 (31 эпизод)	27
Средний возраст	39	47
% Пол (женщины) %
Активность ADAMTS13 <10% (нормальная> 67%)	100%	0%
Средняя активность ADAMTS13	<10%	55 ± 21%
ADAMTS13 Ингибитор> 0. 4 единицы	81%	0%
Количество тромбоцитов при поступлении x10 9 / л (среднее ± стандартное отклонение)	25 ± 28	64 ± 41	0,0001	ЛД единиц / л (среднее ± стандартное отклонение)	1005 ± 634	1337 ± 1430	0,25
Гематокрит при поступлении,% (среднее ± стандартное отклонение)	26,4 ± 7,7	26,8 ± 4,9	0,82	Лихорадка	26%	19%	0.55
Неврологические симптомы	58%	44%	0,43
Креатинин мг / дл (среднее ± стандартное отклонение)	1,35 ± .93	2,49 ± 2,14		Шистоциты	97%	81%	.0913
Низкий гаптоглобин (<16 мг / дл)	92%	60%	.0087	57%	57%	1,0
Выполнено PLEX	90 1	50%
Количество тромбоцитов x10 / л (среднее ) ± SD)	212 ± 79	122 ± 126	0,0024
LD единиц / л (среднее ± SD)	266 ± 91	701 ± 1101	0,042
Смертность 1-2	7%	4%	1.0

> 3. 0 мг / л)

.	TTP .	TMA .	p-значение .
Всего пациентов	26 (31 эпизод)	27
Средний возраст	39	47
% Пол (женщины) %
Активность ADAMTS13 <10% (нормальная> 67%)	100%	0%
Средняя активность ADAMTS13	<10%	55 ± 21%
ADAMTS13 Ингибитор> 0. 4 единицы	81%	0%
Количество тромбоцитов при поступлении x10 9 / л (среднее ± стандартное отклонение)	25 ± 28	64 ± 41	0,0001	ЛД единиц / л (среднее ± стандартное отклонение)	1005 ± 634	1337 ± 1430	0,25
Гематокрит при поступлении,% (среднее ± стандартное отклонение)	26,4 ± 7,7	26,8 ± 4,9	0,82	Лихорадка	26%	19%	0.55
Неврологические симптомы	58%	44%	0,43
Креатинин мг / дл (среднее ± стандартное отклонение)	1,35 ± .93	2,49 ± 2,14		Шистоциты	97%	81%	.0913
Низкий гаптоглобин (<16 мг / дл)	92%	60%	.0087	57%	57%	1,0
Выполнено PLEX	90 1	50%
Количество тромбоцитов x10 / л (среднее ) ± SD)	212 ± 79	122 ± 126	0,0024
LD единиц / л (среднее ± SD)	266 ± 91	701 ± 1101	0,042
Смертность 1-2	7%	4%	1.0

[1]

3 пациента не получали PLEX в TTP: 1 пациент умер во время первого PLEX, другой пациент (свидетель Иеговы) отказался от FFP, а третий пациент начал принимать стероиды вместо PLEX

[2]

Смертность: ВДП: 1-сепсис, 1-облитерирующий бронхиолит, 2-не получал стандартный ПЛЕКС (см. Примечания в [1]), ТМА: 1-дыхательная недостаточность

Выводы:

По нашему опыту, серьезный дефицит ADAMTS13, по-видимому, позволяет различать ТТП от ТМА. У TMA была лучшая смертность, несмотря на то, что он либо не начинал, либо прекращал терапию на основе уровней ADAMTS13.Однако, если бы у нас продолжалась ТЭЛА при ТМА, то эти пациенты считались бы ТТП без ADAMTS13, которые хорошо реагировали на ТЭЛА.

Раскрытие информации:

Нет соответствующего конфликта интересов, о котором следует заявлять.

Зависимая от внутреннего цитоскелета кластеризация белка M2 вируса гриппа с гемагглютинином по оценке FLIM-FRET

РЕФЕРАТ

Гемагглютинин (НА) вируса гриппа организует зону зачатка вируса, область плазматической мембраны, обогащенную липидами рафта.Используя микроскопию для визуализации времени жизни флуоресценции и резонансный перенос энергии флуоресценции (FLIM-FRET), метод, который обнаруживает тесную совместную локализацию флуоресцентных белков в трансфицированных клетках, мы показываем, что вирусный протонный канал M2 объединяется с HA, но не с маркером для внутренних створок створок. Сигнал FRET между M2 и HA зависит от сигналов нацеливания на рафт в HA и от интактного актинового цитоскелета. Мы пришли к выводу, что M2 содержит внутренний сигнал, который направляет белок в зону зачатка вируса, которая организована ассоциированным с рафтом HA и кортикальным актином.

Сборка вируса гриппа происходит на рафтах в плазматической мембране клетки-хозяина (15, 20), микродоменах, богатых холестерином и сфинголипидами (24). Предполагается, что гемагглютинин (НА) организует зону зачатка вируса, поскольку он внутренне нацелен на рафты, где вызывает почкование вирусоподобных частиц (2, 19). Однако в вирусной оболочке сосуществуют упорядоченные и неупорядоченные липидные домены, что позволяет предположить, что зона зачатка вируса не полностью состоит из рафтов (16). Кроме того, диаметры кластеров HA, наблюдаемые с помощью аналитической иммуно-золотой электронной микроскопии и флуоресцентной микроскопии высокого разрешения, намного больше, чем диаметры, обычно связанные с рафтами, и их нерегулярные границы размера указывают на то, что другие факторы, такие как цитоскелет, участвуют в организации зона вирусных почек (8, 9, 13).

Вирусная нейраминидаза также содержит функции нацеливания на рафт и сокластеры с НА на плазматической мембране (13). Протонный канал М2, третий белок оболочки, как, казалось бы, исключен из мембранных плотов (судя по спорным экстракции холодного моющего средства) и частично из формирующихся вирусных частиц (31), хотя она содержит типичный плот-таргетинг функцию, пальмитоилирование (27) , и было предложено связывать холестерин (18, 21). Интересная модель предполагает, что M2 ассоциируется с краем рафтов, где он катализирует отщипывание вирусных частиц (21).В самом деле, цитоплазматический хвост M2 необходим для эффективного почкования вируса. Он содержит сайт связывания M1, привлекающий белок оболочки вируса с внутренних мембран на плазматическую мембрану (3, 14, 29). Кроме того, он несет пальмитоилированную амфипатическую спираль с сайтом связывания холестерина, который может вызывать искривление мембраны (3, 14, 29). Таким образом, чтобы выполнять свою функцию во время почкования вируса, M2 должен быть нацелен на зону зачатка вируса.

Флуоресцентный резонансный перенос энергии (FRET) хорошо подходит для оценки очень близкой (менее 10 нм) совместной локализации двух белков.Соответствующие донорные и акцепторные флуорофоры сливаются с исследуемыми белками, и конструкции коэкспрессируются в одной клетке. Затем FRET можно оценить с помощью микроскопии визуализации времени жизни флуоресценции (FLIM), используя тот факт, что время жизни возбужденного состояния донора будет сокращено в присутствии акцептора в непосредственной близости. Эффективность FRET ( E ) можно рассчитать следующим образом: $$ mathtex $$ \ [E {=} 1 {-} ({\ tau} _ {\ mathrm {DA}} / {\ tau} _ {\ mathrm {D}}) \] $$ mathtex $$ ( 1), где τ _DA — время жизни донора в присутствии, а τ _D — время жизни донора в отсутствие акцептора (определено для 10 клеток, экспрессирующих только донор).Для мембранных белков, однако, недостаточно рассчитать эффективность FRET для оценки кластеризации, поскольку перенос энергии может просто происходить в результате случайного столкновения двух подвижных молекул в мембране. В этом случае эффективность FRET линейно увеличивается с увеличением концентрации акцепторного флуорофора на мембране; Напротив, если FRET обусловлен кластеризацией обоих белков, эффективность FRET в значительной степени не зависит от концентрации акцептора. Для количественной оценки мы использовали уравнение $$ mathtex $$ \ [E {=} E _ {\ mathrm {max}} {\ times} F / (F {+} K_ {D}) \] $$ mathtex $$ (2), который описывает эффективность FRET E как гиперболическая функция концентрации акцепторного белка, оцениваемая по интенсивности его флуоресценции F .Об ассоциативных свойствах донора и акцептора можно судить по значению K _D (константа равновесной диссоциации), которое очень мало по сравнению с диапазоном интенсивности акцептора в случае кластеризации и находится в том же диапазоне, что и или больше, чем диапазон интенсивностей акцептора в случае, если FRET возникает из-за случайного столкновения обеих молекул (30).

С FLIM-FRET мы недавно показали кластеризацию HA с маркерами для внешних и внутренних створок (6, 22). Здесь мы использовали тот же подход, чтобы проанализировать, ассоциируется ли M2 с плотами и совпадает ли он с HA. Мы слили M2 через линкер PPVAT с мономерным желтым флуоресцентным белком (YFP). M2-YFP эффективно переносился к плазматической мембране трансфицированных клеток (фиг. 1A) и пальмитоилировался, как показано метаболическим мечениями с использованием ранее описанной методологии (28) (фиг. 1B). Обратите внимание, что M2-YFP в основном работает как димер с дисульфидной связью, что указывает на то, что произошла олигомеризация (10).Поскольку известно, что олигомеризация и пальмитоилирование происходят в эндоплазматическом ретикулуме (ER) и раннем Golgi, соответственно (11), прикрепление YFP ​​не предотвращает транспорт M2 по экзоцитарному пути.

Для оценки олигомеризации зондов M2 с помощью FLIM-FRET мы затем коэкспрессировали M2-YFP с M2, слитым через тот же линкер с церулеаном (Cer) (17). Флуоресценцию регистрировали в клетках, экспрессирующих M2-Cer и M2-YFP на плазматической мембране, путем последовательного возбуждения лазерами с длиной волны 458 и 515 нм с использованием конфокального микроскопа и изображений времени жизни флуоресценции церулеана (возбужденного на 440 нм с помощью импульсного лазерного диода). были приобретены.

Исходя из этих данных, средняя эффективность FRET была рассчитана как 9,9%, что ниже, чем можно было бы интуитивно ожидать для стабильной и тесной ассоциации донорных (M2-Cer) и акцепторных (M2-YFP) флуорофоров. Однако FRET зависит не только от расстояния донор-акцептор, но и от относительной ориентации дипольных моментов испускания донора и поглощения акцептора, и его нельзя сравнивать между разными парами FRET. Эффективность FRET каждой ячейки наносили на график в зависимости от измеренной интенсивности акцептора в этой ячейке (рис.2А, черные точки). Подгонка уравнения 1 к данным (фиг. 2A, пунктирная линия) показала, что эффективность FRET не зависит от интенсивности флуоресценции акцептора и, следовательно, уровня экспрессии M2-YFP. Кроме того, рассчитанное значение K _D из 196 ниже, чем интенсивности акцепторов (в диапазоне от 279 до 4087), что указывает на стабильную ассоциацию M2-Cer с M2-YFP.

Затем мы оценили ассоциацию M2 с рафтом, используя дважды ацилированный (миристоилированный и пальмитоилированный) пептид, слитый с церулеаном (Myr-Pal-Cer), в качестве установленного маркера для рафтов внутренних листочков (6, 30) и M2-YFP в качестве FRET. акцептор.Была рассчитана средняя эффективность FRET, равная 9,0%, и описанный выше кластерный анализ показал четкую зависимость FRET от уровня экспрессии M2-YFP (фиг. 2B). Кроме того, было вычислено K _D из 8 157, что выше, чем наивысшая интенсивность акцепторов в оценке. Обмен флуорофоров, то есть использование M2-Cer в качестве донора и Myr-Pal-YFP в качестве акцептора, дал аналогичные результаты ( K _D , 10 281; эффективность FRET 5,7%) (рис.2С). Таким образом, в отличие от HA (6), M2 не кластеризуется с маркером внутренних листочков в трансфицированных клетках. Затем мы проверили возможную ассоциацию M2-YFP с маркером рафта в инфицированных вирусом клетках. Было измерено только небольшое увеличение эффективности FRET (10,2%) и незначительное снижение у K _D (3681), что указывает на минимальное увеличение кластеризации (если оно вообще есть) (сравните Рис. 2D с B). Однако мы не хотим исключать возможность того, что ассоциация M2 с липидами рафта, такими как холестерин, увеличивается во время вирусной инфекции (18). Вероятно, что сборка вирусных белков исключает маркер рафта, невирусный белок массой 28 кДа, из сайта почкования, так что Myr-Pal-Cer больше не доступен для взаимодействия с M2-YFP.

Затем мы оценили кластеризацию M2-YFP с HA-Cer (рис. 3A). Мы получили высокую степень кластеризации, о чем свидетельствует эффективность FRET, в значительной степени независимая от интенсивности акцептора, и низкое значение K _D , равное 1,193. Замена флуорофоров снизила эффективность FRET, но кластерный анализ четко выявил связь HA-YFP с M2-Cer (эффективность FRET, 2.6%; K _D , 139) (Рис. 3B). Чтобы доказать специфичность кластеризации HA-M2, мы использовали мутант HA, в котором особенности нацеливания на рафт — ацилирование S по трем остаткам цистеина (12) и последовательность VIL в экзоплазматической половине трансмембранного домена (19, 26) — были заменены серинами и аланинами соответственно (6). Электронная микроскопия показала, что аналогичный мутант HA равномерно распределяется на плазматической мембране, в отличие от пятнистого появления HA дикого типа (26). FLIM-FRET между мутантом HA-Cer (HA-Cer mut) и M2-YFP привел к падению эффективности FRET с 16,3 до 10,6% и увеличению показателя K _D с 1193 до 4823 (рис. 3C). ) по сравнению с ситуацией дикого типа, что указывает на умеренное уменьшение кластеризации.

Предполагается, что цитоскелет организует raft-домены (5) и играет роль в сборке и почковании вируса гриппа (23, 25). Поэтому мы провели измерения FLIM-FRET в присутствии разрушающего цитоскелет препарата цитохалазина D.Эта обработка привела к дальнейшему снижению эффективности FRET до значения 6,4% и резкому увеличению K _D более чем на один порядок до значения 18 474, что намного выше, чем у самого высокого акцептора. интенсивность в оценке и, следовательно, четкое указание на некластеризацию (рис. 3D).

Таким образом, мы показали с помощью FLIM-FRET, что M2 кластеры с HA, но не с маркером для внутренних створок створок. Совместная локализация M2 с HA в основании почкующихся нитевидных частиц совсем недавно была показана с помощью флуоресцентной микроскопии (18). Исследования инфицированных вирусом клеток с помощью иммуноэлектронной микроскопии (иммуно-ЭМ), то есть с разрешением, сравнимым с расстоянием, измеренным в экспериментах FRET, дали смешанные результаты по совместной локализации HA и M2 (3, 13). Кроме того, наша работа показывает внутреннюю кластеризацию M2 и HA в отсутствие других вирусных белков, таких как M1, который, как предполагается, является мостиком между двумя белками (3). Это согласуется с наблюдением, что кластеризация HA с M2 сохраняется, даже когда сайт связывания M1 в M2 удален (3).Кластеризация может быть связана с прямым, ранее нераспознанным молекулярным взаимодействием между HA и M2, которое нарушается описанными мутациями на C-конце HA. Однако, поскольку FLIM-FRET не может отличить молекулярное взаимодействие от очень непосредственной близости, также возможно, что M2 нацелен на зону вирусных зачатков без помощи HA. Почему же тогда M2 группируется с HA, ассоциированным с рафтом, но не с маркером плота? Предполагается, что ГК организует уникальный домен в плазматической мембране, зону зачатка вируса (4), в которой он может быть окружен оболочкой из специфических липидов (1), которые образуют упорядоченные и неупорядоченные домены (16). Отдельные молекулы НА внутри зоны зачатка вируса подвижны (8) и не диффундируют вместе с маркером рафта в стабильный комплекс в течение минут (6). M2 (-YFP) интегрируется или локализуется очень близко к кластерам HA (-Cer) благодаря внутреннему сигналу нацеливания, который может перекрываться с неидентифицированным сигналом для его доставки к апикальной мембране (15). Напротив, HA, лишенный сайтов ацилирования и / или имеющий мутации во внешнем листке своей трансмембранной области, рассредоточен по поверхности клетки, что указывает на то, что он не способен правильно организовать зону вирусного зачатка (3, 26), и, следовательно, HA- Cer mut плохо взаимодействует с M2-YFP.Сходным образом, в отсутствие HA зона вирусных зачатков не формируется и, таким образом, M2-YFP не кластеризуется с маркером рафта, который, вероятно, содержится в небольших динамических рафтах, которые не интегрируют M2. Кластеризация M2 с HA, кроме того, зависит от интактного цитоскелета. Накапливаются доказательства того, что кортикальный актин управляет образованием белковых нанокластеров и / или организует поддержание рафтовых доменов (7). Это может объяснить участие актина в почковании вируса и его присутствие в очищенных вирусных частицах (23, 25).

РИС. 1.

Создание и характеристика M2-YFP. (A) Схема M2-YFP в мембране (серый цвет) и экспрессия M2-YFP на поверхности трансфицированных клеток CHO. (B) Метаболическое мечение клеток, экспрессирующих YFP или M2-YFP, [ ³⁵ S] метионин / [ ³⁵ S] цистеин и [ ³ H] пальмитат в течение 6 часов, как указано, иммунопреципитация антизеленым флуоресцентным белком (GFP) антитело, SDS-PAGE в невосстанавливающих условиях и флюорография. Положения мономера и димера M2-YFP отмечены стрелками.M2 от гриппа A / Duck / Ukraine / 1/63 (h4N8).

РИС. 2.

M2 ассоциируется с самим собой, но не с мембранными плотами. (A) Самоассоциация M2-Cer и M2-YFP, оцененная FLIM-FRET. Эффективность FRET E в плазматической мембране каждой анализируемой клетки нанесена на график в зависимости от интенсивности акцептора F ; к данным подбирается гиперболическая функция (уравнение 1, пунктирная линия). Значение K _D для оценки кластеризации показано вертикальной линией на оси x .Количество ячеек ( n ), 44; средняя эффективность FRET ± стандартная ошибка среднего (SEM), 9,9% ± 0,4%; K _D ± SEM, 196 ± 78. (B) FLIM-FRET маркера рафта Myr-Pal-Cer в качестве донора FRET с M2-YFP в качестве акцептора FRET. n , 31; E ± SEM, 9,0% ± 0,8%; K _D ± SEM _, 8,157 ± 4,679. (C) FLIM-FRET M2-Cer в качестве донора FRET с маркером рафта Myr-Pal-YFP в качестве акцептора FRET. n , 25; E ± SEM, 5.7% ± 0,8%; K _D ± SEM, 10 281 ± 7 935. (D) FLIM-FRET M2-YFP с Myr-Pal-Cer в инфицированных вирусом клетках. Клетки трансфицировали и через 20 часов инфицировали вирусом чумы птиц (H7N1) при множественности инфицирования (MOI) 40. Измерения FLIM-FRET проводили через 4-7 часов после заражения. n , 26; E ± SEM, 10,2% ± 0,8%; K _D ± SEM, 3,681 ± 1,964. Флуоресценцию регистрировали с помощью конфокального микроскопа Olympus FluoView 1000, а FLIM выполняли с помощью комплекта обновления LSM и программного обеспечения SymPhoTime (PicoQuant).

РИС. 3.

Кластеризация M2 с HA. (A) Анализ FLIM-FRET (как описано в легенде к фиг. 2) с HA-Cer дикого типа (HA-Cer wt) в качестве донора FRET и M2-YFP в качестве акцептора FRET. n , 30; E ± SEM, 16,3% ± 1,2%; K _D ± SEM, 1193 ± 509. (B) Анализ FLIM-FRET с M2-Cer в качестве донора FRET и HA-YFP в качестве акцептора FRET. n , 32; E ± SEM, 2,6% ± 0,3%; K _D ± SEM, 139 ± 112. (C) FLIM-FRET HA-Cer mut с M2-YFP. n , 33; E ± SEM, 10,6% ± 0,7%; K _D ± SEM, 4823 ± 1882. (D) FLIM-FRET HA-Cer wt с M2-YFP в присутствии цитохалазина D (1 мкМ, добавлено за 20 ч до измерений). n , 35; E ± SEM, 6,4% ± 0,7%; K _D ± SEM, 18 474 ± ​​8 647. Значение K _D для оценки кластеризации показано вертикальной линией на оси x , где это применимо. В анализе использовали НА вируса чумы птиц (H7N1).Значения относительной донорской и акцепторной интенсивности существенно не различались ( P > 0,01, непарный двусторонний тест Стьюдента t ) между экспериментами с HA-Cer wt (панель A; 100%), HA-Cer mut (панель C; 73%) и HA-Cer wt плюс цитохалазин D (панель D; 122%) в качестве донора FRET и M2-YFP в качестве акцептора (100, 106 и 100%, соответственно), показывая, что использование Обработка мутантом НА и цитохалазином D существенно не изменяла поверхностную экспрессию зондов.

БЛАГОДАРНОСТЬ

Мы выражаем признательность Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) за финансирование (гранты SFB 740 и SPP 1175).

СНОСКИ

• Получено 21 июня 2010 г.
• org/Journal» hwp:start=»2010-09-21″> Принято 21 сентября 2010 г.

• Авторские права © Американское общество микробиологии, 2010 г.

ССЫЛКИ

1. 1.

   Anderson Якобсон. 2002. Роль липидных оболочек в нацеливании белков на кавеолы, рафты и другие липидные домены.Science296 : 1821-1825.

2. 2.↵

   Chen, B.J. и R.A. Lamb. 2008. Механизмы образования окутанных вирусов: могут ли некоторые вирусы обходиться без ESCRT? Virology372 : 221-232.

3. 3.↵

   Чен Б. Дж., Г. П. Лезер, Д. Джексон и Р. А. Лэмб. 2008. Цитоплазматический хвост белка M2 вируса гриппа взаимодействует с белком M1 и влияет на сборку вируса в месте зарождения вируса. Дж.Вирол.82 : 10059-10070.

4. 4.↵

   Чен Б. Дж., Г. П. Лезер, Э. Морита и Р. А. Лэмб. 2007. Гемагглютинин и нейраминидаза вируса гриппа, но не матриксный белок, необходимы для сборки и образования почки вирусоподобных частиц, полученных из плазмиды. J. Virol. 81 : 7111-7123.

5. 5.↵

   Чичили, Г. Р. и У. Роджерс. 2009. Цитоскелет-мембранные взаимодействия в структуре мембранного рафта.Клетка. Мол. Life Sci.66 : 2319-2328.

6. 6.↵

   Энгель, С., С. Сколари, Б. Таа, Н. Кребс, Т. Корте, А. Херрманн и М. Фейт. 2010. FLIM-FRET и FRAP выявили ассоциацию гемагглютинина вируса гриппа с мембранными рафтами. Biochem. J.425 : 567-573.

7. 7.↵

   Госвами Д., К. Гоуришанкар, С. Билграми, С. Гош, Р. Рагхупати, Р. Чадда, Р. Вишвакарма, М. Рао и С. Майор. 2008 г.Нанокластеры GPI-заякоренных белков формируются кортикальной активностью, управляемой актином. Cell135 : 1085-1097.

8. 8.↵

   Hess, S. T., T. J. Gould, M. V. Gudheti, S. A. Maas, K. D. Mills, J. Zimmerberg. 2007. Динамическое кластерное распределение гемагглютинина с разрешением 40 нм в мембранах живых клеток различает теории рафта. Proc. Natl. Акад. Sci. США A.104 : 17370-17375.

9. 9.↵

   Hess, S.Т., М. Кумар, А. Верма, Дж. Фаррингтон, А. Кенуорти и Дж. Циммерберг. 2005. Количественная электронная микроскопия и флуоресцентная спектроскопия мембранного распределения гемагглютинина гриппа. J. Cell Biol. 169 : 965-976.

10. 10.↵

    Holsinger, L.J., and R.A. Lamb. 1991 г. Интегральный мембранный белок М2 вируса гриппа представляет собой гомотетрамер, стабилизированный за счет образования дисульфидных связей. Вирусология 183 : 32-43.

11. 11.№

    Холсингер, Л. Дж., М. А. Шонесси, А. Микко, Л. Х. Пинто и Р. А. Лэмб. 1995. Анализ посттрансляционных модификаций белка М2 вируса гриппа. J. Virol.69 : 1219-1225.

12. 12.↵

    Кордюкова Л.В., Серебрякова М.В., Баратова Л.А., Вейт М. 2008. S-ацилирование гемагглютинина вирусов гриппа: масс-спектрометрия выявляет сайт-специфическое присоединение стеариновой кислоты к трансмембранному цистеину.J. Virol. 82 : 9288-9292.

13. 13.↵

    Leser, G.P., and R.A. Lamb. 2005. Сборка и почкование вируса гриппа в микродоменах, полученных из рафта: количественный анализ поверхностного распределения белков HA, NA и M2. Virology 342 : 215-227.

14. 14.↵

    McCown, M. F., and A. Pekosz. 2006. Отдельные домены цитоплазматического хвоста белка M2 вируса гриппа A опосредуют связывание с белком M1 и способствуют образованию инфекционного вируса.J. Virol.80 : 8178-8189.

15. 15.↵

    Наяк Д. П., Р. А. Балогун, Х. Ямада, З. Х. Чжоу и С. Барман. 2009. Морфогенез и почкование вируса гриппа. Virus Res.143 : 147-161.

16. 16. ↵

    Полозов, И.В., Л. Безруков, К. Гавриш, Дж. Циммерберг. 2008. Прогрессивное упорядочивание с понижением температуры фосфолипидов вируса гриппа. Nat. Chem. Биол.4 : 248-255.

17. 17.↵

    Риццо, М. А., Г. Х. Спрингер, Б. Гранада и Д. В. Поршень. 2004. Улучшенный вариант голубого флуоресцентного белка, полезный для FRET. Nat. Biotechnol.22 : 445-449.

18. 18.↵

    Россман, Дж. С., Х. Цзин, Г. П. Лезер, В. Баланник, Л. Х. Пинто и Р. А. Ламб. 2010. Белок m2 ионного канала вируса гриппа необходим для образования нитчатого вириона. J. Virol. 84 : 5078-5088.

19. 19.№

    Шайффеле П., М. Г. Рот и К. Саймонс. 1997. Взаимодействие гемагглютинина вируса гриппа с мембранными доменами сфинголипид-холестерин через его трансмембранный домен. EMBO J.16 : 5501-5508.

20. 20. ↵

    Schmitt, A. P., and R. A. Lamb. 2005. Сборка и почкование вируса гриппа в вирусном будозоне. Adv. Virus Res.64 : 383-416.

21. 21.↵

    Schroeder, C., H.Heider, E. Möncke-Buchner и T. I. Lin. 2005. Ионный канал вируса гриппа и кофактор созревания М2 представляет собой холестерин-связывающий белок. Евро. Биофиз. J.34 : 52-66.

22. 22.↵

    Сколари, С., С. Энгель, Н. Кребс, А. П. Плаццо, Р. Ф. Де Алмейда, М. Прието, М. Фейт и А. Херрманн. 2009. Боковое распределение трансмембранного домена гемагглютинина вируса гриппа, выявленное с помощью флуоресцентной визуализации с временным разрешением. J. Biol. Chem.284 : 15708-15716.

23. 23.↵

    Шоу, М. Л., К. Л. Стоун, К. М. Коланджело, Э. Э. Гульчичек и П. Палезе. 2008. Клеточные белки в частицах вируса гриппа. PLoS Pathog.4 : e1000085.

24. 24.↵

    Simons, K., and E. Ikonen. 1997. Функциональные рафты в клеточных мембранах. Nature387 : 569-572.

25. 25.↵

    Симпсон-Холли, М., Д. Эллис, Д. Фишер, Д. Элтон, Дж. Макколи и П.Дигард. 2002. Функциональная связь между актиновым цитоскелетом и липидными рафтами во время почкования нитчатых вирионов гриппа. Virology301 : 212-225.

26. 26.↵

    Такеда М., Г. П. Лезер, К. Дж. Рассел и Р. А. Лэмб. 2003. Гемагглютинин вируса гриппа концентрируется в микродоменах липидного рафта для эффективного слияния вирусов. Proc. Natl. Акад. Sci. США A.100 : 14610-14617.

27. 27.↵

    Вейт, М., Х. Д. Кленк, А. Кендал и Р. Ротт. 1991. Ацилирован белок M2 вируса гриппа А. J. Gen. Virol.72 : 1461-1465.

28. 28.↵

    Veit, M. , E. Ponimaskin и M. F. Schmidt. 2008. Анализ S-ацилирования белков. Методы Мол. Биол. 446 : 163-182.

29. 29.↵

    Ван, Д., А. Хармон, Дж. Джин, Д. Х. Фрэнсис, Дж. Кристофер-Хеннингс, Э. Нельсон, Р. К. Монтеларо и Ф. Ли. 2010 г.Отсутствие врожденного сигнала нацеливания на мембрану является причиной неспособности белка матрикса (M1) вируса гриппа A образовывать вирусоподобные частицы. J. Virol. 84 : 4673-4681.

30. 30.↵

    Захариас, Д. А., Дж. Д. Скрипка, А. К. Ньютон и Р. Ю. Цзянь. 2002. Разделение липид-модифицированных мономерных GFP на мембранные микродомены живых клеток. Science296 : 913-916.

31. 31.↵

    Чжан, Дж., A. Pekosz и R.A. Lamb. 2000. Сборка вируса гриппа и микродомены липидного рафта: роль цитоплазматических хвостов гликопротеинов шипа. J. Virol.74 : 4634-4644.

5 декабря (05.12.2328) — Утро и вечер Чарльза Сперджена

Утро

«Просите, и дано будет вам».
Матфея 7: 7

Мы знаем, что в Англии до сих пор существует место, где каждому прохожему, желающему его попросить, подают хлебную порцию.Кем бы ни был путешественник, он должен просто постучать в дверь больницы Сент-Кросс, и ему будет дана подача хлеба. Иисус Христос так любит грешников, что построил больницу Святого Креста, так что всякий раз, когда грешник голоден, ему остается только постучать и удовлетворить свои нужды. Нет, он добился большего; он пристроил к этой Больнице Креста ванну; и всякий раз, когда душа черная и грязная, ей достаточно пойти туда и омыться. Фонтан всегда полон, всегда работает. Ни один грешник никогда не входил в него и не обнаруживал, что он не может смыть его пятна.Все грехи алые и багряные исчезли, и грешник стал белее снега. Как будто этого было недостаточно, к этой Больнице Креста пристроен гардероб, и грешник, претендующий просто как грешник, может быть одет с головы до ног; и если он желает быть воином, он может иметь не просто обычную одежду, но и доспехи, которые должны покрывать его от подошвы ноги до макушки головы. Если он попросит меч, он даст ему меч и щит.Ему не может быть отказано во всем, что хорошо для него. У него будут деньги на траты, пока он жив, и он будет иметь вечное наследие славных сокровищ, когда войдет в радость своего Господа.

Если все это можно получить, просто постучав в дверь милосердия, о душа моя, стучи сегодня утром сильно и проси большого у твоего великодушного Господа. Не покидай престола благодати, пока все твои нужды не будут раскрыты перед Господом, и пока верой ты не получишь утешительную перспективу, что все они будут удовлетворены.Когда Иисус приглашает, не следует отказываться от стеснения. Когда Иисус обещает, никакое неверие не должно мешать. Когда нужно получить такие благословения, не должно сдерживаться бессердечие.

Вечер

«И показал мне Господь четырех плотников».
Zechariah 1:20

В видении, описанном в этой главе, пророк увидел четыре ужасных рога. Они продвигались туда и сюда, бросаясь вниз на самых сильных и могущественных; и пророк спросил: «Что это?» Ответ был: «Это рога, которые рассеяли Израиль. «Он увидел перед собой прообраз тех сил, которые угнетали церковь Божью. Было четыре рога; ибо церковь подвергается нападению со всех сторон. Пророк вполне мог испугаться, но внезапно перед ним предстали четыре плотника. Он спросил: «Что они будут делать?» Это люди, которых Бог нашел, чтобы сломать эти рога на куски. Бог всегда найдет людей для своей работы, и он найдет их в нужное время. Пророк не видел Сначала плотники, когда было нечего делать, а сначала «рожки», а затем «плотники».«Более того, Господь находит достаточно людей. Он нашел не трех плотников, а четырех; рогов было четыре, а рабочих должно быть четыре. Бог находит нужных людей: не четырех человек с перьями, чтобы писать; не четырех архитекторов, чтобы рисовать. планов; но четыре плотника будут выполнять грубую работу. Будьте уверены, вы, трепещущие за ковчег Божий, что, когда «рога» вырастут в беспокойство, найдутся «плотники». Вам не нужно беспокоиться о слабости церкви Бог в любой момент; в безвестности может вырасти отважный реформатор, который потрясет народы: Златоусты могут появиться из наших Рваных школ, а Августины — из густой тьмы лондонской бедности. Господь знает, где найти своих слуг. У него в засаде множество сильных, и по его слову они выступят в бой; «ибо битва принадлежит Господу», и он одержит победу. Будем же верными Христу, и Он в нужное время воздвигнет нам защиту, будь то день нашей личной нужды или время опасности для Его Церкви.

12 февраля (12.02.2328) — Утро и вечер Чарльза Сперджена

Утро

«Ибо, как страдания Христовы преизобилуют в нас, так и утешение наше преизобилует Христом.
2 Коринфянам 1: 5

Есть благословенная пропорция. Правитель Провидения несет на себе весы — с этой стороны он кладет испытания своего народа, а в этой — их утешения. Когда масштаб испытания близок пусто, вы всегда найдете шкалу утешения почти в одном и том же состоянии; а когда шкала испытаний заполнится, шкала утешения покажется вам такой же тяжелой. Когда черные тучи собираются больше всего, свет проявляется ярче Когда наступает ночь и приближается буря, Небесный Капитан всегда находится ближе всего к своей команде. Благословенно то, что когда мы больше всего подавлены, тогда мы больше всего возносимся утешениями Духа. Одна из причин в том, что испытания дают больше утешения. Большие сердца могут быть сделаны только большими неприятностями. Лопата неприятностей глубже копает резервуар комфорта и оставляет больше места для утешения. Бог входит в наше сердце — он находит его полным — он начинает нарушать наши утешения и делать его пустым; тогда будет больше места для благодати. Чем смиреннее лжет мужчина, тем больше у него всегда будет утешения, потому что он будет более приспособлен к его принятию.Еще одна причина, по которой мы чаще всего счастливы в своих бедах, заключается в том, что тогда мы имеем самые близкие отношения с Богом. Когда сарай полон, человек может жить без Бога: когда кошелек ломится от золота, мы стараемся обходиться без стольких молитв. Но однажды уберите наши тыквы, и мы захотим нашего Бога; однажды очистив идолов из дома, мы будем вынуждены чтить Иегову. «Из глубины воззвал к Тебе, Господи». Нет более хорошего крика, чем тот, который доносится с подножия гор; нет молитвы наполовину такой сердечной, как та, которая исходит из глубины души через глубокие испытания и невзгоды.Поэтому они приводят нас к Богу, и мы становимся счастливее; ибо близость к Богу — это счастье. Приди, встревоженный верующий, не беспокойся о своих тяжелых бедах, ибо они — вестники веских милостей.

Вечер

«Он даст вам другого Утешителя, да пребудет с вами вовек».
Иоанна 14:16

Великий Отец явил Себя верующим древности до пришествия Своего Сына и был известен Аврааму, Исааку и Иакову как Всемогущий Бог. Затем пришел Иисус, и вечно благословенный Сын в своем собственном облике был радостью для глаз своего народа.Во время вознесения Искупителя Святой Дух стал главой нынешнего устроения, и его сила великолепно проявилась во время Пятидесятницы и после нее. Он остается в этот час настоящим Эммануилом — Богом с нами, пребывающим в своем народе и со своим народом, оживляющим, руководящим и правящим среди них. Признано ли его присутствие так, как должно быть? Мы не можем контролировать его работу; он наиболее суверенен во всех своих действиях, но достаточно ли мы озабочены, чтобы получить его помощь, или достаточно бдительны, чтобы не спровоцировать его отказаться от помощи? Без него мы ничего не можем сделать, но с его всемогущей энергией могут быть достигнуты самые выдающиеся результаты: все зависит от того, как он проявляет или скрывает свою силу.Всегда ли мы с уважением относимся к нему как к своей внутренней жизни, так и к внешнему служению с уместной уважительной зависимостью? Разве мы не слишком часто бежим к его зову и действуем независимо от его помощи? Давайте смирим себя в этот вечер за прошлые пренебрежения, а теперь умоляем небесную росу почить на нас, священный елей, чтобы помазать нас, небесное пламя, чтобы гореть внутри нас. Святой Дух — это не временный дар, он пребывает со святыми. Нам нужно только искать его правильно, и он будет найден нами. Он ревнив, но жалок; если он уходит в гневе, он возвращается в милосердии.